پیپت زنی یکی از رایج‌ترین عملکردهایی است که در آزمایشگاه‌ها انجام می‌شود. هم به عنوان یک تکنیک اندازه‌گیری و هم به عنوان وسیله‌ای برای برداشتن حجم‌های کوچکی از مایع، مورد استفاده قرار می‌گیرد. در مقاله قبلی که به بررسی مقایسه ویژگی های پیپت آزمایشگاهی پرداختیم ، انواع پیپت ، کاربردها و تفاوت هر یک را بیان کردیم. در این مقاله به اهمیت برداشتن محلول حتی در حجم کم با پیپت ها می پردازیم چرا که اگر حتی در حجم کم هم اشتباهی رخ دهد، تاثیر بسزایی بر روی پژوهش و نتایج آزمایش ما خواهد گذاشت.
چند انحراف استاندارد از میانگین؟ جلوگیری از ناهنجاری‌های آماری در دسته‌های داده
صرف نظر از اینکه شما داده‌ها را برای کسب مجوز از سازمات غذا دارو جمع آوری میکنید یا داده‌های با کیفیت انتشاری را برای کسب رضایت داوران،باید بدانید که عدم ارائه اطلاعات درست آماری می‌توانند ارزش اطمینان از یک مجموعه داده را از بین ببرند. منابع متعددی از متغیرها هنگام کار با حجم‌های میکرولیتری مایع برای تحلیل تجربی وجود دارند.
اول، تغییرپذیری درون‌فردی درجه‌ای از تفاوت است که در چندین مجموعه داده توسط یک فرد واحد انجام شده. تغییرپذیری بین‌فردی درجه‌ای از تفاوت است که بین چندین عامل که یک وظیفه یکسان را انجام می‌دهند، انجام می‌شود. هر دوی این منابع تغییرپذیری می‌توانند تاثیر قابل توجهی بر صحت داده‌ها داشته باشند.
انواع واریانس در پیپت زنی
واریانس درون عملگر (Intra-operator) در دستکاری مایع دستی معمولاً از طریق تفاوت‌ها در پیپت‌ها (ابزارها) یا تغییرات دقیقه‌ای در روش بوجود می‌آید. به عنوان مثال، هنگام پیپت زنی به یک میکروپلیت، اپراتور ممکن است پیپت را کاملاً عمودی نگه ندارد، که باعث ایجاد تفاوت‌هایی در فشار کاپیلاری نوک پیپت می‌شود. بنابراین، شما ممکن است تغییرات کوچکی در مقدار مایع تزریق شده مشاهده کنید.
به طور مشابه، با پیپت زنی چندین بار به همان میکروپلیت، اپراتور ممکن است نوک پیپت را به طور مداوم با دیواره چاه لمس نکند. در حالی که این منابع معمولاً باعث تفاوت‌هایی در حجم تخصیص نانو یا پیکولیتر می‌شوند، می‌توانند تاثیرات ژرفی بر خواندن تجربی داشته باشند.
واریانس بین عملگر در دستکاری مایع دستی معمولاً از طریق تفاوت‌ها در تکنیک عملگر وارد می‌شود. بعنوان مثال فشار اعمال شده به یک پیپت هنگام تزریق مایع . مرحله نهایی پیپت زنی تکی شامل فشار هوا از طریق نوک برای “دمیدن” هر مایع باقیمانده است.
در حالی که برخی از اپراتورها ممکن است مقدار کافی فشار اعمال کنند، دیگران ممکن است فشار زیادی بیاورند یا مایع را بسرعت خارج کنند. هر یک از این تفاوت‌ها می‌توانند در زمان اکتساب داده‌ها منجر به خواندن‌های قابل توجه متفاوت شوند. این انحرافات به کاهش ارزش‌های صحت داده های آماری منجر می‌شوند، شاید حتی به زیر مقدار 99.7٪ قرار گیرند.
روش‌هایی برای دستیابی به بازه اطمینان 99.7٪ در روش پیپت زنی برداشتن دستی مایع
بیایید به بحث در مورد تغییرات ابزار برگردیم. تکنیک یک اپراتور فقط به اندازه دقت ابزاری است که وی از آن استفاده می‌کند. به همین دلیل، همیشه باید از یک پیپت فردی برای یک آزمایش معین یا هنگام تکرار آزمایش‌ها استفاده شود. بنابراین، در حالی که دقت پیپت ممکن است کم باشد، درجه واریانس در سراسر نمونه‌ها و مجموعه‌های داده ثابت خواهد ماند.
علاوه بر این، همیشه باید پیپت‌ها به درستی نگهداری شوند. که شامل تمیز کردن و مراقبت است. دقت و صحت نیز باید هنگام اندازه‌گیری مشخصی از مایع بررسی شود. این گام‌ها می‌توانند به طور قابل توجهی نتایج به دست آمده در روش‌های دستکاری مایع بهبود بخشند.
در حالی که خطای دستگاه متداول است، خطای عملیاتی (انسانی) هنگام پیپت زنی از طریق برداشتن دستی مایع مسئله‌ای بسیار بزرگ‌تر و گسترده‌تر است. برای مقابله با این خطا، چندین راه‌حل برای محقق وجود دارد. ابتدا، پرسنل خود را به طور منظم آموزش و بازآموزی کنید. دستورالعمل‌هایی برای پیپت زنی صحیح راه طولانی در کاهش اشتباهات خواهد داشت.
روش های پیپت زنی عملیاتی را در فواصل منظم ارزیابی کرده و در صورت نیاز اقدامات اصلاحی را اعمال کنید. اجرای “پلیت‌های آزمایشی” برای این ارزیابی‌ها ممکن است مواد واکنشی گران قیمتی را مصرف کند، اما بهتر از این است که مجبور به توجیه داده خارج از محدوده و با درصد اطمینان پایین به داور شوید.
به سمت الکترونیک بروید!
پیپت‌های الکترونیکی شاید مفیدترین ابزار در ریشه‌کن کردن خطاها در روش‌های پیپت زنی باشند. دقت و تکرارپذیری آن‌ها به مراتب بیشتر از پیپت‌های دستی، از جمله پیپت‌های چند کاناله است. هر دو واریانس درون‌عملیاتی و بین‌عملیاتی به یک سطح قابل مدیریت کاهش می‌یابد. تا زمانی که پرسنل شما برای برنامه‌ریزی دقیق این پیپت‌ها آموزش دیده باشند، مقدار مایع تزریق شده قطعاً دقیق‌تر از ابزارهای دستی خواهد بود.
اپراتورها می‌توانند با چرخاندن یک دکمه یا فشار دادن یک دکمه اطمینان حاصل کنند که حجم‌های مشخص در نوسانات پذیرفته شده به مقدار مطلوب خواهد بود. علاوه بر این، ابزارهای الکترونیکی از نظر کارایی به پیپت‌های دستی برتری دارند، که فشار را کاهش داده و تضمین می‌کند که مایعات به موقع تزریق می‌شوند.
پیپت‌های الکترونیکی گران تر هستند اما استدلالاً مفیدترین و موثرترین راه‌حل در مبارزه با بازه‌های اطمینان ضعیف هستند.
نتیجه گیری
بطور کلی پیپت زنی اگر به درستی انجام شود ، نتایج حاصل از آزمایش را با دقت و انحراف معیار درست تری نشان خواهد داد. پیپت زنی به روش دستی با بروز خطاهایی مواجه است اما استفاده از پیپت الکترونیک درصد خطای ناشی از داده ها را کاهش می دهد.
اگر تمایل به خرید پیپت آزمایشگاهی دارید با بازرگانی سپلو در تماس باشید.